NIT-1細胞的培養方法

一.細胞簡介：
細胞名稱：nit-1/小鼠胰島素瘤β細胞
智立編碼：20211259101371674
組織來源胰腺/朗格漢斯胰島
生長特性貼壁細胞
細胞形態上皮細胞樣
生物安全等級2
生長培養基ham'sf-12k＋10%fbs＋1%p/s
傳代比例1:2-1:3
換液頻率2~3次/周
凍存條件
凍存液：55%基礎培養基+40%fbs+5%dmso
溫度：液氮
二.　培養條件
氣相：空氣，95%；co2，5%
溫度：37℃
保藏機構atcc;crl-2055
培養條件：37℃，5%co2，90%rpmi-1640+10%fbs。
三.　復蘇步驟：
1.新制100mm平皿1個，含12ml上述培養液；
2.凍存管從液氮或-80℃中取出，37℃水浴1~2min,待完全溶解后盡快移入安全柜復蘇；
3.用無菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，順時針搖勻；
4.放入（37℃，5%co2）培養箱中，過夜換液，2-4天長滿。
傳代/凍存：將舊培養液吸除，pbs清洗兩遍后，加入2ml（/100mm皿/t25瓶）胰酶（0.25%trypsin+0.02%edta），在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養皿，細胞剛有脫落時，吸除大部分胰酶，留約0.5ml，移至培養箱消化，約1min取出。
1.傳代：6ml培養液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可1:3傳代；
2.凍存：3ml凍存液（50%基礎培養基+40%fbs+10%dmso）終止消化，吹打均勻，分為3支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存。
四.　注意事項：
1.收貨當天發現異常，請在24小時內及時聯系客服，逾期視為收貨良好；
2.凍存管形式，收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應過夜轉移至液氮保藏；
3.t25形式，收貨后先培養瓶原裝置于培養箱靜養4h，然后再對細胞進行常規操作。
4.復蘇時每管一次用完不得留存，復蘇后傳一代，即可正常使用。請嚴格按照本說明操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發服務。