人可溶性白細胞抗原G(sHLA-G)ELISA檢測

實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（elisa）。往預先包被人可溶性白細胞抗原g(shla-g))捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、hrp標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物tmb顯色，tmb在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人可溶性白細胞抗原g(shla-g)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（od 值），計算樣品濃度。
保存條件及有效期
1.本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中人可溶性白細胞抗原g(shla-g)的含量；
2.試劑盒保存：2-8℃；
3.有效期：6個月。
人可溶性白細胞抗原g(shla-g)elisa試劑盒
標本的采集及保存
1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.血漿：可用edta或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° c 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 (注：標本溶血會影響**檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。)
人可溶性白細胞抗原g(shla-g)elisa試劑盒
標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。計算濃度時，稀釋了“n”倍，標本的濃度應再乘以“n”。
標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
生物素標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。
辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。
人可溶性白細胞抗原g(shla-g)elisa試劑盒
操作步驟
實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。
3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（od值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。 人可溶性白細胞抗原g(shla-g)elisa試劑盒
注意事項
1.用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。
2.每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是**加底物溶液及2n h2so4。測量時先用此孔調od值至零。
3.為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。
4.未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。
5.建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
人可溶性白細胞抗原g(shla-g)elisa試劑盒
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算 以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），od值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的od值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與od值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的od值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。
2.洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
3.一次加樣時間**控制在5分鐘內，如標本數量多，建議使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。
5.如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請乘以稀釋倍數。
6.在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。
7.底物請避光保存。
8.不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
注意事項：收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4 ℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本， 將標本及時分裝后放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃可保存48 小時，-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。 計算：以標準物的濃度為橫坐標，od值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的od值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與od值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的od值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 人可溶性白細胞抗原g(shla-g)elisa試劑盒
試劑盒性能
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數r值為0.92以上。
2.批內與批見應分別小于9%和15% 人可溶性白細胞抗原g(shla-g)elisa試劑盒 ​